摘要：为了解牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻在昆明地区的感染情况和流行趋势，该研究于2021—2022 年采用实时荧光PCR 方法对昆明市16 个乡镇61 家肉牛规模殖场的1394 份棉拭子样品进行牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻病毒核酸检测。结果显示，2021 年，牛传染性鼻气管炎病毒核酸个体阳性率0.23%、场群阳性率为2.78%，牛病毒性腹泻病毒核酸个体阳性率0.35%、场群阳性率为2.78%；经及时指导养殖场淘汰阳性病牛，2022 年牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻病毒核酸全部为阴性。可见，及时发现并积极防控对根除牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻具有重要意义。

近年来，随着人们生活水平的显著提高和消费需求的不断变化，牛肉已成为仅次于猪肉的第二大肉类消费品，人均消费量由2016 年的1.8kg增加到2021 年的4.2kg，肉牛产业进入了前所未有的超长景气期。云南省以肉牛“一县一业”示范创建为切入点和有力抓手，大力推动肉牛产业高质量发展，致力打造中国南方重要的肉牛生产基地和高端肉牛供应基地。而动物疫病防控作为防范畜牧业发展风险的第一道防线和确保绿色畜产品质量安全的关键环节，对绿色食品产业健康发展发挥着重要作用。在肉牛生产过程中，不仅要认真抓好牛口蹄疫、牛结节性皮肤病等重大疫病防控，牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻等肉牛主要病毒性传染病对肉牛生产的危害也不容忽视，更需做好日常防控。通过查阅文献资料，很多学者在国内开展牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻流行病学调查结果发现，不同地区、不同养殖模式和不同养殖规模下，牛群牛传染性鼻气管炎病毒V 和牛病毒性腹泻病毒感染情况存在一定差异，且随着养牛产业的不断发展，呈现出逐年波动上升的趋势。2010—2019 年期间，牛传染性鼻气管炎病毒平均感染率从31.12%升高至41.80%，其中2016 年高达58.29%，且感染阳性牛只主要集中在屠宰场、牧场和规模场，交易市场和散养户阳性率较低，仅为22.88%和19.70%。奶牛感染阳性率明显高于肉牛，宁夏作为奶牛主要养殖区，牛传染性鼻气管炎病毒平均抗体阳性率已达85.1%。相对于牛传染性鼻气管炎病毒，牛群的牛病毒性腹泻病毒感染率水平相对较高，内蒙古、山东、甘肃牛病毒性腹泻病毒抗体阳性率分别为88.9%、65%、56.36%。李天增等调查了全国98 家牧场（养殖场）的血清抗体，结果牛病毒性腹泻病毒抗体阳性牛场占比99.47%。牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻俨然已成为影响我国肉牛产业健康发展的重要传染病。

牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻是严重影响养牛业生产安全的重要传染病。牛传染性鼻气管炎又称“坏死性鼻炎”或“红鼻病”，是由牛疱疹病毒Ⅰ型引起的以高热、咳嗽、呼吸困难等为常见症状的一种接触性传染病，60 日龄以内的犊牛最易感，临床症状复杂多样，具体可细分为呼吸道型、生殖系统型、流产型、脑膜炎型、眼结膜炎型四种类型。牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的以发热、黏膜糜烂、坏死、腹泻等为主要特征的一种急性、热性传染病，多种动物均易感。牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻具有很多相似之处，牛只一旦感染，将终身携带病毒并长期排毒，还常引起免疫抑制而形成多种细菌和病毒的继发感染，有些感染牛只常常不表现临床症状，呈隐形带毒，在实际生产中很难被发现，这也造成了这两种病防控难度较大的局面。这两种病毒已广泛分布于世界各地，我国学者最早于1980 年在新西兰进口的奶牛中分离牛传染性鼻气管炎病毒以及吉林省一家奶牛场发现并分离出牛病毒性腹泻病毒。

随着我国养牛业的不断壮大和发展，流行趋势不断上升，大部分省份均有牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒感染的资料报道，2012年10 月份云南省就有12 例牛传染性鼻气管炎，有些省份规模场牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒抗体检测阳性感染率分别高达77.8%和88.9%，牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻防控形势日趋严峻。我国将牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻分别列为二类和三类动物疫病，均是我国进境动物必检疾病，被世界动物卫生组织设为B 类动物疫病。为准确掌握昆明地区规模养牛场牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻的感染情况和流行趋势，本研究于2021—2022 年对全市16 个乡镇61 家规模养牛场流行情况进行了调查分析，并提出了科学防控建议。

1.1 被检样品

2021—2022 年连续2 年选取昆明市辖区内16 个乡镇规模在300 头左右的中型肉牛规模场共61 家，随机采集棉拭子样品1394 份，其中2021年采集36 家肉牛规模殖场的854 份棉拭子样品，2022 年采集25 家肉牛规模场的540 份棉拭子样品。所采棉拭子样品均立即置于1.0mL DMEM 培养液中，随后放于-20℃冰箱中保存待检。

1.2 检测试剂

牛传染性鼻气管炎病毒核酸检测试剂盒购自广州维伯鑫生物科技股份有限公司，牛病毒性腹泻病毒核酸检测试剂盒购自青岛立见诊断技术发展中心。

1.3 主要仪器

荧光定量PCR 检测仪（ABIQ5）。

1.4 操作方法

试剂使用前应在常温下充分融化并混匀后备用，按试剂盒说明书步骤配制反应体系，充分混匀，按照20μL 反应体积分装到PCR 反应管中，瞬时离心后备用；取出样本后混匀，将阴性对照、待检样本、阳性对照各5μL 加入到PCR 反应管中混匀，盖上管盖后2000r/min 离心30s。将PCR 反应管放入PCR 仪内，其中：牛传染性鼻气管炎病毒核酸检测时PCR 反应条件设置为50℃污染消化2min，95℃预变性2min，PCR 进行40 个循环（95℃变性15s，60℃退火30s）；牛病毒性腹泻病毒核酸检测时PCR 反应条件设置为50℃污染消化15min，95℃预变性2min，PCR 进行40 个循环（95℃变性15s，60℃退火30s）。

1.5 结果判定

按照相应试剂盒说明书判定样品牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒核酸检测结果。

通过连续2 年分别对昆明市36 家、25 家肉牛规模养殖场进行牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻病原学调查，结果如表1 所示：①2021 年，牛传染性鼻气管炎病毒核酸阳性牛2 头，均为2岁左右的母牛，个体阳性率0.23%；阳性个体均来自同一规模养殖场，该场规模在300 头左右，场群阳性率2.78%。牛病毒性腹泻病毒核酸阳性牛3 头，个体阳性率0.35%；阳性个体均来自同一规模养殖场，该场规模在200 头左右，场群阳性率2.78%。②在对2021 年两个阳性场点持续进行监测的基础上，2022 年又筛选确定了23 家规模养殖场，统一组织开展牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒核酸检测，结果全部为阴性。总的来看，2 年间昆明市牛传染性鼻气管炎病毒核酸平均个体阳性率0.14%，平均场群阳性率1.64%；牛病毒性腹泻病毒核酸平均个体阳性率0.21%，平均场群阳性率1.64%。

表1 昆明市肉牛规模牛场牛染性鼻气管炎病原学和牛病毒性腹泻病原学检测结果

牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻均无特效治疗方法，且存在隐性感染和终身排毒，都是造成这两种病难以控制和消灭的根本原因。国外牛传染性鼻气管炎防控策略主要有2 种，奥地利、丹麦等一些发达国家主要是通过检疫淘汰逐步消灭该病，但这种方式资金投入较大，很多国家未能采用；还有一些欧洲国家通过使用gE 基因标记疫苗和实施免疫监测相结合策略，区分自然感染和疫苗接种动物，及时发现牛传染性鼻气管炎阳性牛只，从而进行清除计划。同样对于牛病毒性腹泻，发达国家的防控策略也基本和牛传染性鼻气管炎一致，北欧的瑞典和挪威等低密度养牛国家不适合采用疫苗免疫，严格生物安全管理，通过“筛查-淘汰”的策略逐步消灭该病；也有像美国和德国等高密度养牛国家一样，通过“疫苗免疫-监测淘汰”的策略控制该病。

在我国，关于牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻防控策略还没有正式明确，各地区采用的方式也不一样，如内蒙古2021 年全国首家制定了DB15/T2195-2021 《规模化牛场病毒性腹泻-黏膜病净化技术规范》，并在全区规模化奶牛场和肉牛场推广应用。特别是随着畜牧业的快速发展和国际贸易自由化进程的不断推进，动物疫病防控也逐渐摒弃传统工作观念，将动物疫病净化作为畜牧业高质量发展的重要标志。近年来，国家高度重视动物疫病净化工作，陆续出台了一系列政策文件并作出了相关安排部署，如2021 年新修订的《动物防疫法》，明确将“净化消灭”纳入动物防疫的方针和要求；2022 年农业农村部出台的《关于推进动物疫病净化工作的意见》中也提出了要在5 年内建成一批高水平的动物疫病净化场，这为各地开展动物疫病防控，推进动物疫病净化指明了方向。

我国也有商品化的牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻二联灭活疫苗，通过借鉴国外成功的防控经验，结合我国关于动物疫病净化的相关文件精神，针对昆明市牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻感染性较低的情况，特提出“监测-淘汰-净化”的防治策略，具体内容为：①坚持自繁自养。规模养牛场尽量避免从外面购买牛只，做到自繁自养。确需购买的，应详细了解牛只来源和过往发病史，并做好入场前隔离观察，坚决不能购入来源不明的牛只。②持续监测淘汰。一旦发现阳性感染牛只，立即淘汰，并对牛群持续开展健康监测，筛选隐形持续感染牛只，排除牛只隐性排毒风险，控制传染源，这是有效控制和净化牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻确保牛群长期健康最有效的方法。③加强饲养管理。严格落实生物安全管理措施，做好日常环境卫生消毒管理，避免因环境问题造成潜伏期内牛体内的病毒被激活而向外界持续排毒，导致疫病扩散，切实提高防疫管理水平。④严格牛只检疫。昆明市辖区内拥有云南省乃至西南地区最大的活牛交易市场，作为全国活牛贸易的主要集散地之一，活牛来源广泛、日均入场牛数达7000 头以上、年交易牛只35 万头。因此对于入昆牛只，除了做好检疫票证检查和瘦肉精等抗生素残留检测外，牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻等主要牛病检疫尤为重要。

本研究结果显示，2021 年昆明地区肉牛规模养殖场牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒群体感染率较低，均为2.78%，其中牛传染性鼻气管炎病毒群体阳性率低于2010 年云南省部分规模牛场30%的群体阳性率水平，远低于西南地区的群体平均阳性率水平44.11%[3,11]。在检出2例牛传染性鼻气管炎阳性牛只和3 例牛病毒性腹泻阳性牛只后，市级业务部门及时指导养殖场淘汰阳性病牛，并对圈舍进行全方位消毒。2022 年对阳性场点和规模养殖场又进行了持续监测，其中阳性场点除了采集棉拭子外，还采集了圈舍内不同区域内的环境，均未检出牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒。说明及时淘汰阳性牛只并加强生物安全管理对于控制牛传染性鼻气管炎和牛病毒性腹泻具有一定意义。

参考文献：（略）

来源：中国畜禽种业