59194345

中国执业兽医网

您现在所在的位置:首页>新闻资讯>行业新闻

新闻资讯

中国C-株疫苗研究历史

日期:2021-04-21 10:51:36

中国C-株疫苗研究历史

王琴/中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室

01

全球猪瘟流行现状



1833年猪瘟在美国俄亥俄州首次暴发,随后从美国传播到英格兰,再到南非,再到日本。在1945年在石家庄解放区分离出石门毒株。目前猪瘟依然存在于我国部分地区,呈点状散发流行特点,且发病年龄小,成年猪带毒现象严重,非典型症状和繁殖障碍型猪瘟增多。所以根除猪瘟依然是一个巨大挑战。
 
众所周知,传染病流行过程的基本环节分为传染源、传播途径、易感动物。而接种疫苗的目的性是降低易感动物的易感性。通过有计划的免疫接种使得动物群体获得免疫力的动物达到一定比例,就不会发生传染病的大规模暴发流行,获得免疫力的动物比例越高,风险就越小。但即使100%的群体被注射疫苗免疫,也不是100%能获得充分的免疫力,猪瘟的群体免疫水平的国家标准为70%。最重要的是烈性传染病的暴发处于失控的状态,使用有效的疫苗以减少损失应该是重要的防控措施,可降低死亡率和发病率,也是生物安全的重要组成部分。

猪瘟无疫国家和地区的预防与控制措施主要通过严密的日常监测与检疫制度,用突发疫情时的应急扑灭措施来保持无疫状态,确保疫病暴发时疫情不扩散并被迅速扑灭。该方法虽然快速有效,但是由于成本过于昂贵和造成环境污染而招致越来越大的争议。猪瘟染疫国家和地区的控制措施主要依靠疫苗免疫。除此之外,在出现疫情时应立即采取隔离封锁措施,扑杀发病和感染动物,对疫点进行消毒和限制动物流动,对暴露动物和受威胁动物实施紧急免疫接种以防疫情扩大。但非典型猪瘟或持续性感染猪瘟的出现,使得猪瘟难以根除。

02

猪瘟疫苗的研究历史



病毒-血清免疫
1903年,美国畜牧局对感染猪的血液进行细胞过滤后发现过滤的细胞能够导致猪瘟,确认导致猪瘟的是一种病毒。1906年美国开始生产猪瘟高免血清。1912年,最新研究表明,要取得有效的保护不仅需要高免血清,而且还需要同时注射带有活病毒的血液。在中国,东南大学于1925年开始研制免疫血清防治该病。但是,用病毒-血清进行免疫,有散毒风险。
 
猪瘟灭活疫苗
首先研制成功的是结晶紫疫苗,在结晶紫疫苗的基础上研制出猪瘟的灭活疫苗,能够安全的用于无猪瘟的地区。但通过研究发现制苗毒株和采毒时间直接影响疫苗的免疫效力,制苗的关键是选择一株免疫原性优越的毒株、选择最佳时期采取病猪的血毒抗原或组织抗原,掌握恰当的灭活时间。经比较发现石门株免疫原性最好,1954年农业部批准了猪瘟灭活苗的制造规程。但由于灭活疫苗的免疫效力不高,成本却很高,使用强度感染株制造结晶紫疫苗易造成散毒等问题,所以以后的兽用生物制品规程中不再收录用猪瘟石门强毒作为抗原的猪瘟灭活疫苗产品,后来人们的目标转向弱毒活疫苗的研究上。
 
猪瘟兔化弱毒疫苗(C-株的问世)
1950年,哈兽研从国外引进仍有一定毒力的国外弱毒株为起始材料,在兔体传350多代后,终于培育出一株适用于家兔的猪瘟兔化弱毒株,国际上称为“C-株”。猪体实验表明该毒株不仅对猪安全,还保持了优良的免疫病原性,而且毒力返祖的可能性很小。用该毒株免疫猪4d即可产生免疫保护力,一次接种产生的免疫保护期可达1年以上。该毒株于1956年用于生产弱毒疫苗,并在全国使用推广。1956年中国政府将该毒株以先进科技成果先后无偿赠送给前苏联、匈牙利等国家。匈牙利应用证明,来自北京的兔化弱毒优于英美当时的商品弱毒苗,对种猪、乳猪无残余毒力。后来该种毒传到大部欧洲国家及一些拉美国家。
 
猪瘟兔化弱毒疫苗的应用及升华
动物组织疫苗:1957年,开始推广家兔脾淋组织兔化弱毒疫苗;1964年研制成功乳兔组织疫苗,1965年在全国推广使用,提高了产量降低了生产成本;同期研究出牛体反应苗,即牛淋巴结、脾脏组织疫苗,并在局部区域使用。由于上述疫苗均为活体动物组织疫苗,而使用牛制作疫苗成本太高且批次不稳定,随着乳兔组织冻干苗的应用,牛体疫苗不再使用,脾淋苗也逐渐减少。2005年,因牛睾丸细胞易携带BVDV,又启动了脾淋组织兔化弱毒苗的生产和应用。
 
原代细胞源活疫苗:1974年,猪肾原代细胞猪瘟疫苗研究获得成功,1975年在全国推广使用,后因疫苗被猪瘟强毒污染而停用;1980年与1982年分别研制出绵羊和山羊的肾原代细胞猪瘟疫苗,缺点是产量太小;1985年研制成功犊牛睾丸原代细胞猪瘟疫苗,在全国推广使用至今,长达36年。
 
传代细胞源活疫苗:2005年研制出猪睾丸传代细胞猪瘟疫苗,2008年起农业部指定在全国16个省市推广使用;2020年军科院与勃林格猪瘟活疫苗(C-株,PK/WRL传代细胞源)研制成功。
 
猪瘟兔化弱毒C-株疫苗的特点
首先,安全性高。对不同品种和年龄猪均无残存毒力,用该毒株接种猪只后不引起猪的发病和死亡,偶尔可见少数接种猪出现轻微的体温升高,C-株口服接种也非常安全有效,可用于家猪和野猪的口服免疫。其次,免疫效力强。采用从中国不同地区分离的猪瘟野毒株进行攻毒,C-株疫苗接种猪的免疫保护效力均接近100%,注射3d后即可产生良好的免疫保护力,断奶仔猪免疫保护率可达100%,免疫期可达1.5年,中和抗体通常在接种2周后产生,随后上升并持续4~12周以上。最后,应用C-株对受猪瘟威胁猪进行紧急免疫接种不仅能获得免疫力,而且能降低感染性病毒在接种动物体内的复制效率,阻断或减缓野毒的传播,降低接种猪对病原的敏感性,从而产生群体免疫力。除此之外,C-株对国际上流行的不同基因型毒株均能提高交叉保护,且遗传性状稳定。
 
猪瘟兔化弱毒疫苗的应用
到目前为止,在一些有猪瘟流行的国家和地区,猪瘟弱毒疫苗接种仍然是控制猪瘟的主要手段。猪瘟兔化弱毒疫苗(中国C-株)、日本和法国的细胞弱毒疫苗等仍被广泛用于猪瘟的预防控制。通过疫苗免疫等综合防治措施,许多欧美等发达国家已消灭了猪瘟。在个别无猪瘟的西欧国家对待偶尔暴发的猪瘟疫情,主要采取扑杀的方法,但在野猪出没地区及一些易发生猪瘟的高风险地区,多采用C-株口服疫苗免疫野猪,防治野猪向家猪传播疫情。此外,一些欧洲国家在高风险地区有时也使用亚单位疫苗进行家猪的免疫预防,他们也在开发可以鉴别人工免疫与自然感染的新型疫苗。中国仍是以疫苗接种为手段控制猪瘟的国家之一,弱毒疫苗的广泛使用对于防治猪瘟起到了重要作用。
 
猪瘟病毒的培养工艺研究
转瓶培养和悬浮培养均使用贴壁细胞,转瓶培养细胞在转瓶上贴壁生长。而微载体悬浮培养细胞在微载体上贴壁,由于微载体的表面积大,单位体积病毒产量常常高于贴壁培养10倍以上。转瓶生产工艺同批次需要多个转瓶,不同转瓶之间病毒产品差异大。悬浮培养同批次抗原在相同环境下产生,批内差异小。

产品工艺研究
产品工艺的研究提高了疫苗的质量。微载体悬浮技术的优点是提高效价、连续收毒;纯悬浮的优点是细胞在不断搅动的液体培养基里悬浮生长,其成本更低,比微载体悬浮培养更易扩大规模。低血清培养可以降低外源污染风险,降低生产成本;而冻干工艺为疫苗提供耐热保护剂,佐剂的筛选减低了猪只接种后的应激反应、减少免疫频次、延长疫苗的保护期。
 
猪瘟其他疫苗的研究
猪瘟DIVA疫苗为标记疫苗,其是一种配以鉴别诊断方法的新型疫苗,即可以通过血清学抗体检测区别免疫抗体与野毒感染抗体的一种新型疫苗。通过对野毒株或弱毒疫苗进行基因操作,插入、移除或突变某一位点,以区别于原始毒株。根据增加或消除某一标记位点,可以将标记疫苗分为阳性标记和阴性标记。根据增加部分的来源,可以将阳性标记分为外源性阳性标记和内源性阳性标记。而且有望作为新一代疫苗来替代传统弱毒疫苗,新型标记疫苗有望达到控制与净化的需求。

基因突变疫苗是基因突变株的构建经历了从以强毒为基础到以弱毒为基础的转变,而且在技术上正在不断完善。除此之外腺病毒活载体疫苗、基因重组疫苗、亚单位疫苗等也在研究中,并已取得了很大的进展。其中必须要提的是猪瘟病毒E2亚单位疫苗,其原理是将病原微生物的E2保护性抗原基因导入受体菌或细胞,使其在受体中高效表达保护性抗原蛋白,以此抗原蛋白制成的一类疫苗就成为了亚单位疫苗。因其只含有病原体的一种或几种抗原蛋白,不含有病原体的其他遗传信息,因而无需灭活,也无致病性,非常安全。不仅如此,通过建立配套的检测Erns抗体的ELISA方法,可以区分免疫抗体和感染抗体,有利于猪瘟净化和根除。还有猪瘟DNA疫苗,其本质是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA(RNA),DNA疫苗的使用就是将编码某种蛋白质抗原的重组真核表达载体直接注射到动物体内,使外源基因在体内表达,产生的抗原直接激活机体的免疫系统,从而诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答,起到免疫保护的作用。DNA疫苗被称为继常规疫苗、亚单位疫苗之后的第三代疫苗,具有广阔的发展前景。

03

C-株疫苗的再评价



发现中国猪瘟病毒流行株基因组稳定,并证明现用猪瘟疫苗对我国流行毒株能有效保护,否定了多年认为“由野毒株变异引起免疫失败”的学术争端,一旦监测到野毒株低于81.6%,立刻进行动物实验验证;C-株能抵抗全世界流行的三个基因型野毒的攻击;C-株疫苗不仅为世界上一些国家消灭猪瘟作出了贡献,至今对我国猪瘟控制的基本策略也是有效的,但是随着猪瘟消灭的进程加快,应尽快加强新型DIVA疫苗的研发进程,赋予C-株新的含义。

04

消灭疫病必须采取综合防控措施


 
疫苗在猪瘟消灭过程中只是阶段性使用
因为疫苗免疫在非感染时只能降低猪群的易感性;感染时则起到降低疫病严重程度,减少病毒分泌以及防止子宫内感染的作用,并不能完全阻断病毒的感染与排毒,更不能以此消灭猪瘟;如果没有一个好的免疫策略,疫苗免疫也只能是减少损失而已,仅靠疫苗免疫是无法彻底和根除猪瘟的。
 
新型诊断技术在动物疫病的控制过程中是关键
准确快速的诊断技术为提升传染病的监控能力,及时采取措施控制传染病向更大范围的流行发挥了重要的作用;新型诊断技术结合信息技术在疫情诊断、分析、监测和生物信息学等防控措施中发挥了重要作用。
 
猪瘟防治思路
应该树立以预防为主的防控方针,以源头控制、分类指导、梯度推进为防治原则,以养殖场、养殖户为防控主体,以疫病净化为防治重点。不断完善养殖场生物安全体系,严格落实免疫预防、监测净化、检疫监管、应急处理、无害化处理等综合防控措施,积极开展场群或区域净化工作,降低发病率,压缩流行范围,有效清除病原,逐步实现净化目标。(本文根据专家录音整理,未经专家本人审阅,如有出入,以专家本人意见为准。)

来源:《兽医导刊》杂志


京ICP备13017971号地址:北京市朝阳区农展北路55号

北京华牧直通广告有限公司 版权所有 电话:010-59195279Email:zgzysyw@126,com