（一）疫苗
某企业猪口蹄疫O、A型二价灭活疫苗。
（二）实验器材
单道、12道移液器若干，96孔U型反应板若干，37℃恒温生化培养箱、100ml量筒、iMark-酶标仪。
（三）血清样品
福建某养殖场提供50日龄、60日龄、80日龄、110日龄、140日龄商品猪血清各20份。该规模化养殖场口蹄疫疫苗的免疫程序为：母猪一年普免三次；仔猪90日龄免疫一次。
（四）检测试剂盒
口蹄疫O型、A型液相阻断抗体检测试剂盒，购自兰州兽研生物有限公司。
（五）实验方法及判定标准
采用液相阻断ELISA测定免疫动物血清中口蹄疫特异性抗体，具体方法如下：
1.待检血清稀释按50ul每孔用PBST做1:16开始的2倍稀释至1:128，每孔加入50ul稀释至规定浓度的口蹄疫病毒灭活抗原，对照孔加100ul，振荡混匀，4℃过夜。
2.过夜后，将抗原抗体板上的液体按每孔50ul转移到包被0型口蹄疫病毒兔抗的ELISA反应板上，37℃避光温育60min。
3.弃去各孔中液体，甩干。每孔加满PBST清洗液，静置约30s，重复5次，拍干，每孔加入50ul口蹄疫病毒豚鼠抗体工作液，37℃避光温育30min。
4.弃去各孔中液体，甩干。每孔加满PBST清洗液，静置约30s，重复5次，拍干，每孔加入50ul口蹄疫病毒兔抗豚鼠抗体酶结合物工作液，37℃避光温育30min。
5.弃去各孔中液体，甩干。每孔加满PBST清洗液，静置约30s，重复5次，拍干，每孔加入50ul显色液（TMB底物A、B溶液按1:1混匀），37℃避光温育15min。
6.每孔加入50ul终止液，读取OD450nm值。
7.结果判定：以抗原抗体对照平均OD450nm的50%为临界值，被检血清稀释孔OD450nm的值大于临界值，抗体滴度为＞1:128；小于或等于临界值，抗体滴度为﹤1:32；若临界值处于两个滴度之间，应取中间值。
