非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）引起的家猪和野猪的一种急性、烈性、高度接触性传染病，发病率和致死率可高达100%，严重威胁着全球养猪业、食品安全和经济发展。自2018年8月我国首次爆发ASF疫情至今，高毒力基因II型、低毒力基因II型和基因I型三种不同类型的ASFV陆续被报道，使得ASFV感染的鉴别诊断更具挑战性。
近期，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家非洲猪瘟专业实验室完成的题为“Developing a duplex ARMS-qPCR method to differentiate genotypes I and II African swine fever viruses based on their B646L genes”的研究快报在Journal of Integrative Agriculture (《农业科学学报》(英文)，JIA) 在线发表。
该研究通过比对126株基因I型和II型ASFV的B646L基因C端用于基因分型的碱基序列，发现了四个单核苷酸多态性（SNP）位点，利用突变阻滞扩增系统（ARMS）和定量实时PCR（qPCR）技术开发了一种双重ARMS-qPCR方法。进一步研究显示，该方法与PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV和PoRV七种病原无交叉反应，具有较高的特异性；能够稳定的检测含有10个拷贝数的基因I型和II型ASFV B646L基因的标准品质粒，敏感性较好；组间和组内变异系数均小于2.2%，重复性良好。此外，ARMS-qPCR方法成功鉴别诊断出血液、口腔和直肠拭子、组织和细胞培养物等36个基因I型和II型ASFV感染样本，与动物世界卫生组织（WOAH）推荐的qPCR方法检测结果一致。
ARMS-qPCR方法可用于检测和区分基因I型和基因II型ASFV，为我国ASF的监测和诊断提供重要的技术支撑。
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https://doi.org/10.1016/j.jia.2023.02.035
Cite the article: DING Lei-lei, REN Tao, HUANG Lian-yu, Weldu Tesfagaber, ZHU Yuan-mao, LI Fang, SUN En-cheng, BU Zhi-gao, ZHAO Dong-ming. 2023. Developing a duplex ARMS-qPCR method to differentiate genotypes I and II African swine fever viruses based on their B646L genes. Journal of Integrative Agriculture, Doi:10.1016/j.jia.2023.02.035.
研究团队简介 国家非洲猪瘟专业实验室受农业农村部指定成立于2019年2月，依托中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、国家动物疫病防控高级别生物安全实验室支撑运行。针对国家非洲猪瘟防控的重大需求，开展病原变异、传播、致病及免疫机制的基础研究，研发安全、有效疫苗和新型检测与诊断技术，为我国非洲猪瘟防控提供理论指导和技术支撑；积极有效履行农业农村部部署的各项职能，重点围绕我国北方省区开展非洲猪瘟流行病学监测和疫情诊断，参与非洲猪瘟诊断试剂的评价及技术标准的制定、修订，参与防控政策实施效果的评估等工作。 实验室成立以来取得一系列重要研究进展。成功分离鉴定我国多个田间流行非洲猪瘟病毒强毒株及低致死率自然变异株，分别完成其基因组精细解析，建立了动物感染发病模型；通过合作研究解析了非洲猪瘟病毒精细结构，提出可能的组装机制，相关研究被评为“2019年度中国科学十大进展”；非洲猪瘟疫苗科技攻关进展顺利，研制的基因缺失弱毒活疫苗完成了实验室产品质量研究、大生产工艺研究及中间试制、生物安全评价生产性试验和新兽药临床试验。有关研究先后发表在Science、Emerging Microbes and Infections、Science China-Life Sciences、Protein and Cell、PLoS Pathogens等学术刊物。
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