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非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和非典型猪瘟

病毒多重RT-PCR检测方法的建立

Huixin Liu，Kaichuang Shi，Wenchao Sun，Jing Zhao，Yanwen Yin，Hongbin Si，Sujie Qu，Wenjun Lu

PMID: 33127443  DOI: 10.1016/j.jviromet.2020.114006

非洲猪瘟病毒（ASFV）、猪瘟病毒（CSFV）和非典型猪瘟病毒（APPV）给全世界养猪业造成了巨大的经济损失，实现这些病毒的早期准确诊断对控制由它们引起的疾病至关重要。本研究基于这些病毒高度保守的基因序列设计了三对特异性引物，在优化各种反应条件的基础上，建立了ASFV、CSFV和APPV的多重逆转录聚合酶链反应（mRT-PCR）检测方法。

mRT-PCR检测包括两个步骤，即逆转录（RT）和多重PCR。该检测方法对ASFV、CSFV和APPV具有高度特异性、敏感性和重复性，且与其他猪病原体无交叉反应。使用含有特定病毒靶片段的纯化质粒作为模板，ASFV的检测灵敏度可达到6.34×102拷贝/μL，CSFV和APPV的检测灵敏度可达到6.34×101拷贝/μL。利用该mRT-PCR方法，对2018-2019年中国广西省疑似感染的384份仔猪临床样本进行检测。结果表明，ASFV、CSFV和APPV的阳性率分别为43.75%、13.28%和4.17%，ASFV/CSFV、ASFV/APPV和CSFV/APPV的共感染率分别为5.47%、1.83%和1.30%。为了解广西省新发现的APPV病毒的流行病学特征，随机抽取APPV阳性动物的临床标本进行扩增和测序，获得了4株APPV病毒的完整基因组序列。系统发育分析表明，广西APPV株系具有高度的遗传多样性。

本研究为ASFV、CSFV和APPV的快速检测和准确诊断提供了重要工具。

内质网应激（ERS）介导的自噬对于许多哺乳动物病毒的复制和发病机制的调节是必不可少的。之前的研究已经证明，猪瘟病毒（CSFV）感染会诱导ERS介导的自噬过程以维持其在体内和体外的病毒复制，但是，其潜在机制尚不清楚。

本研究发现CSFV感染可通过激活PERK和IRE1/GRP78途径诱导完全自噬，以促进其在PK-15和3D4/2等细胞中的病毒复制。此外，CSFV还可促进感染细胞中促炎细胞因子（IFN-γ和TNF-α）基因的转录，诱导激活PERK和IRE1通路，从而进行潜在的免疫调节。

本文的研究结果为CSFV的可持续复制和发病分子机制开辟了新的视野，为靶向CSF治疗策略的发展奠定了理论基础。

表达蛋白的纯化是亚单位疫苗生产中最关键的环节。亲和层析、离子交换等蛋白质纯化方法存在时间长、操作复杂等缺点。随着计算分子模拟技术的快速发展，基于蛋白结构的高亲和力多肽配体技术已成为可能。本研究应用分子对接技术设计了用于猪瘟病毒E2蛋白纯化的多肽配体，并研究了其与E2的体外结合作用。此外，还评估了纯化过程对E2蛋白的影响。

结果显示，识别E2蛋白的最佳肽为P6，其序列为KKFYWRYWEH。基于表面等离子体共振（SPR）分析，P6的表观亲和常数为148nm。小鼠免疫抗体检测结果显示，接种后第42天抗体阻断率可达到86.18%和90.68%。

本研究设计的多肽具有较高的灵敏度和特异性，可用于猪瘟病毒E2蛋白的纯化。新的设计方法为蛋白肽筛选提供了广阔的平台和强大的工具，也为猪瘟疫苗设计提供了新的思路。

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基于荧光探针的实时逆转录

重组酶辅助扩增猪瘟病毒方法的建立

Fei Tu，Xintan Yang，Shengkui Xu，Dengjin Chen，Lei Zhou 1，Xinna Ge，Jun Han，Yongning Zhang 1，Xin Guo， Hanchun Yang

PMID: 32979245  DOI: 10.1111/tbed.13849

由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪瘟（CSF）仍然是全球养猪业最重要的经济疾病之一。快速可靠地检测CSFV对于疫情防控至关重要。本研究开发了一种基于荧光探针的实时逆转录重组酶辅助扩增（rRT-RAA）分析方法，用于CSFV检测。该检测方法针对所有CSFV基因型中5'非翻译区（5'NTR）内的高度保守区域，对CSFV高度特异，且不与其他重要病毒发生交叉反应。敏感性分析表明，该方法与用于CSFV检测的逆转录荧光定量PCR（RT-qPCR）方法相当。rRT-RAA法具有良好的重复性，实验内和实验间的变异系数均<8.0%。在135份样本中（包括102份临床组织样本和33份不同的CSFV细胞培养分离株），分别有50份和52份样本经rRT-RAA和RT-qPCR检测为CSFV阳性，两种检测方法的符合率为98.5%（133/135）。进一步的线性回归分析显示，rRT-RAA和RT-qPCR分析之间存在显著相关性，R2值为0.8682。有趣的是，rRT-RAA分析的扩增产物可以在便携式蓝光成像仪下直接用肉眼观察，从而使现场诊断成为可能。

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32979245/

信息来源：中国动物卫生与流行病学中心